Avaliação de alterações urinárias e função renal em gestantes com hipertensão arterial crônica / Urinary abnormalities and renal function in pregnant women with chronic hypertension

Resumo Introdução: O acometimento renal em gestantes portadoras de hipertensão arterial crônica (HAC) não é amplamente conhecido. Objetivos: 1- Descrever o perfil epidemiológico de pacientes com HAC; 2- Avaliar a ocorrência de alterações urinárias e de função renal (por meio de determinação sérica de creatinina, cistatina C e ritmo de filtração glomerular estimada - RFGe); 3- Avaliar o desfecho das gestações em HAC. Métodos: Foram submetidas a avaliações clínicas e laboratoriais 103 gestantes com HAC (pressão arterial acima de 140/90 mmHg, identificada previamente à gestação ou até a 20ª semana). Resultados: As gestantes tinham 21-45 (média: 34) anos; 12,6% eram primigestas, 64,1% tiveram múltiplas gestações. A relação proteinúria/creatininúria em amostra isolada estava alterada em 5,2% casos (0-6,44 g/g), creatinina sérica estava elevada em 19,6% e cistatina C em 14,7%. Na avaliação das características da gestação em pacientes com HAC e seus recém-nascidos (RN) (vs. frequências nos casos com CKD-EPI cistatina C < 60 ml/min/1,73 m2), observou-se: 20,5% (33,3%) de nascidos pré-termo < 37 sem, 17,5% (22,2%) de RN com peso < 2500 g e 17,5% (22,2%) de RN pequeno para a idade gestacional (PIG); sobreposição de DHEG ocorreu em 24,7% (22,2%) dos casos. Conclusão: Alterações renais foram identificadas por proteinúria, creatinina e cistatina C séricas em 5,2%, 19,6 e 14,7% das gestantes. Os resultados sugerem que as fórmulas do CKD-EPI e MDRD também podem ter aplicabilidade nessa avaliação em gestantes. Detectou-se alta frequência de RN pré-termo ou com menos de 2500 g ao nascer ou PIG, assim como de sobreposição de DHEG (24,7%) em gestantes com HAC.

Abstract Introduction: Renal involvement in pregnant women with chronic hypertension is not widely known. Objectives: 1- To describe the epidemiological profile of pregnant women with chronic hypertension; 2- To evaluate urinary abnormalities (by urinalysis), renal function (serum creatinine and cystatin C, and estimated glomerular filtration rate (eGFR); 3- To evaluate the pregnancy outcome in chronic hypertension. Methods: 103 pregnant women with chronic hypertension (blood pressure over 140/90 mmHg, detected previously to pregnancy or until the 20th week) were submitted to clinical and laboratorial evaluation. Results: Pregnant women were 21-45 (mean: 34) years-old. Protein/creatinine ratio in random urine was elevated in 5.2% (0.0-6.4g/g), serum creatinine in 19.6% and cystatin C in 14.7% of them. It was observed that characteristics of pregnant patients and their newborns (vs. frequencies of the cases with CKD-EPI cystatin C < 60 ml/min/1.73 m2) were: 20.5% (33.3%) of preterm birth < 37 weeks, 17.5% (22.2%) of birth weight < 2500g and 17.5% (22.2%) of small for gestational age; superimposed preeclampsia-eclampsia occurred in 24.7% (22.2%) of the cases. Conclusions: Renal abnormalities were detected by proteinuria, determinations of serum creatinine and cystatin C in 5.2, 19.6 and 14.7% of the cases. The results suggest that the formulas CKD-EPI and MDRD can have applicability in assessing renal function in pregnant women. It was also shown a high frequency of preterm birth or with < 2500g at birth or small for gestational age, as well as of superimposed preeclampsia-eclampsia (24.7%) in pregnant women with chronic hypertension.

Podocitúria em gestantes hipertensas crônicas pode predizer dano renal? / Podocyturia in pregnant women with chronic hypertension may predict kidney injury?

OBJETIVO: Avaliar a presença de podocitúria em gestantes hipertensas crônicas no terceiro trimestre da gestação e a associação com doença renal. MÉTODOS: Estudo observacional descritivo em uma amostra de conveniência de 38 gestantes hipertensas crônicas. Os podócitos foram marcados com técnica de imunofluorescência indireta com antipodocina e diamidino-fenilindol (DAPI). A contagem foi feita a partir de 30 campos analisados de forma aleatória, corrigida pela creatinina urinária (podócitos/mg de creatinina). Foram assumidos dois grupos: grupo GN (função glomerular normal), com até 100 podócitos, e grupo GP (provável glomerulopatia), com mais de 100 podócitos. A dosagem de creatinina foi realizada com uso da técnica do picrato alcalino. As variáveis de análise foram o índice de massa corpórea, a idade gestacional na coleta, a pressão arterial sistólica e a pressão arterial diastólica no momento da coleta. Para a análise dos dados, foi utilizado o programa SPSS - versão 16.0. (IBM - USA). Nas análises estatísticas, foi utilizado o teste do χ2, sendo consideradas diferenças significantes valores de p<0,05. RESULTADOS: A contagem de podócitos no grupo GN teve mediana de 20,3 (0,0 a 98,1), e no grupo GP, de 176,9 (109,1 a 490,6). A média do índice de massa corpórea foi 30,2 kg/m2 (DP=5,6), a média da idade gestacional foi de 35,1 semanas (DP=2,5), a mediana da pressão arterial sistólica foi de 130,0 mmHg (100,0-160,0) e a mediana da pressão arterial diastólica de 80,0 mmHg (60,0-110,0). Não houve correlação significativa entre podocitúria e índice de massa corpórea (p=0,305), idade gestacional na coleta (p=0,392), pressão arterial sistólica (p=0,540) e pressão arterial diastólica (p=0,540). CONCLUSÕES: Não foi identificado um padrão de podocitúria compatível com a presença de glomerulopatia ativa, ainda que algumas das gestantes (15,8%) tenham exibido perda podocitária expressiva. Consideramos ser prematuro recomendar para a prática ...

PURPOSE: To evaluate the presence of podocyturia in chronic hypertensive pregnant women in the third trimester of pregnancy and its possible association with renal disease. METHODS: This was an observational study of a convenience sample of 38 chronic hypertensive pregnant women. The podocytes were labeled by the indirect immunofluorescence technique with anti-podocin and diamidino-phenylindole (DAPI). The count was made on 30 random fields analyzed and corrected according to urinary creatinine (podocytes/mg creatinine). The patients were assigned to two groups: NG (normal glomerular function), up to 100 podocytes, and GP (probable glomerulopathy), more than 100 podocytes. Urinary creatinine was measured by the alkaline picrate method. The variables analyzed were body mass index, gestational age, and systolic and diastolic blood pressure at the time of sample collection. Data were analyzed using the SPSS - version 16.0 (IBM - USA). Statistical analysis was performed by the χ2 test, and significant differences were considered when p<0.05. RESULTS: The median podocyte count was 20.3 (0.0-98.1) for group GN, and 176.9 (109.1-490.6) for GP. The mean body mass index was 30.2 kg/m2 (SD=5.6), mean gestational age was 35.1 weeks (SD=2.5), median systolic blood pressure was 130.0 mmHg (100.0-160.0) and median diastolic blood pressure was 80.0 mmHg (60.0-110.0). There was no significant correlation between podocyturia and body mass index (p=0.305), gestational age (p=0.392), systolic blood pressure (p=0.540) or diastolic blood pressure (p=0.540). CONCLUSIONS: In this study, there was no podocyturia pattern consistent with the presence of active renal disease, although some of the women studied (15.8%) exhibited a significant loss. We believe that it is premature to recommend the inclusion of the determination of podocyturia in routine prenatal clinical practice in chronically hypertensive pregnant women. .

Detecção de podocitúria em pacientes com nefrite lúpica / Detection of podocyturia in patients with lupus nephritis

INTRODUÇÃO: A podocitúria tem sido detectada em doenças glomerulares, tais como em nefrite lúpica (NL), em que a proteinúria é uma manifestação importante, e sua ocorrência parece limitar-se à fase ativa da doença. OBJETIVO: Avaliar a podocitúria por imunofluorescência em pacientes portadores de NL e verificar possível associação com atividade clínica da doença. MÉTODOS: Foram avaliados 56 pacientes com NL. Os pacientes foram divididos em três grupos de acordo com o grau de atividade clínica: Grupo B, sem atividade (n = 17); Grupo C, com atividade discreta (n = 29) e Grupo D, moderada a grave (n = 10). Como grupo controle, foram incluídos 29 indivíduos saudáveis (Grupo A). A podocitúria foi estudada por meio de imunofluorescência indireta, usando-se anticorpos primários antipodocina, nefrina e sinaptopodina, e anticorpo secundário conjugado à FITC. Também foram avaliados os níveis de creatinina sérica e da relação proteína/creatinina (P/C) urinária, assim como a presença de hematúria e leucocitúria. RESULTADOS: A podocitúria com antipodocina e com antissinaptopodina correlacionou-se estatisticamente com a relação P/C (p = 0,001 e p = 0,013, respectivamente). Tanto a podocitúria com antipodocina, quanto a relação P/C, apresentaram correlação significante (p < 0,001) com a graduação de atividade da doença na NL, diferentemente do que se observou com os outros dois anticorpos, antinefrina e antissinaptopodina. CONCLUSÃO: Nossos achados sugerem que a pesquisa de podocitúria com anticorpos antipodocina poderia ser útil no acompanhamento de pacientes com NL, fornecendo dados relevantes quanto à atividade da doença.

INTRODUCTION: The podocyturia has been detected in glomerular diseases, such as lupus nephritis (LN), in which proteinuria is an important manifestation, and its occurrence seems to be limited to the active phase of the disease. OBJECTIVE: To evaluate podocyturia in LN patients, and the possible association with clinical disease activity. METHODS: We evaluated 56 patients with LN, that were classified in three groups according to the degree of clinical activity: Group B, no activity (n = 17), Group C with mild (n = 29) and Group D, moderate to severe activity (n = 10). The control group was composed by 29 healthy subjects (Group A). The podocyturia was studied by indirect immunofluorescence using primary antibodies to podocyte: anti-podocin, nephrin and synaptopodin, and a secondary antibody conjugated with FITC. We also evaluated serum creatinine levels, urinary protein/creatinine (P/C) ratio, hematuria and leucocituria. RESULTS: The podocyturia with anti-podocin and anti-sinaptopodin correlated statistically with the P/C ratio (p = 0.001 and p = 0.013, respectively). The podocyturia with anti-podocin, as well as the P/C ratio showed significant correlation (p < 0.001) with the degree of lupus disease activity, unlike the other two antibodies, anti-nephrin and anti-synaptopodin. CONCLUSION: Our findings show that podocyturia with anti-podocin could be useful in monitoring disease activity in LN patients.

Relação proteína/creatinina na urina versus proteinúria de 24 horas na avaliação de nefrite lúpica / Urinary protein/creatinine ratio versus 24-hour proteinuria in the evaluation of lupus nephritis

INTRODUÇÃO: Tem-se defendido a utilização do índice urinário proteína e creatinina em substituição à determinação de proteinúria de 24 horas para acompanhamento de doenças glomerulares, considerando-se as vantagens de maior facilidade na coleta e o menor custo. Entretanto, há dúvidas quanto à pertinência de usar este índice tanto numa avaliação isolada como no seguimento de pacientes com nefrite lúpica. OBJETIVO: Avaliar as determinações de proteinúria de 24 horas e proteinúria em amostra isolada de urina, fazendo a correção pela creatinina urinária, relação proteinúria/creatininúria, em indivíduos com nefrite lúpica. MÉTODOS: Determinações de proteinúria de 24 horas e relação proteinúria/creatininúria por métodos convencionais (Pirogalol automatizado para proteinúria e picrato alcalino para creatinina). RESULTADOS: Foram comparadas 78 amostras de urina de 41 pacientes com diagnóstico de lúpus eritematoso sistêmico, segundo os critérios da Associação Americana de Reumatologia, com nefrite lúpica, constatando-se uma boa correlação entre proteinúria de 24 horas e relação proteinúria/creatininúria (r = 0,9010 e r² = 0,813). Não se observou, entretanto, uma boa correlação entre proteinúria em amostra isolada (sem correção pela creatinina urinária) versus aquela de 24 horas (r = 0,635 e r² = 0,403) ou versus relação proteinúria/creatininúria (r = 0,754 e r² = 0,569). CONCLUSÃO: Os marcadores de proteinúria de 24 horas e relação proteinúria/creatininúria isoladamente mostraram-se úteis no acompanhamento de cada caso. Porém, observou-se que os seus valores absolutos são diferentes, não possibilitando a substituição de um pelo outro ao longo do seguimento, particularmente quando este resultado é usado para definição de atividade da doença. Se necessário, sugere-se um período de intersecção (duas a três determinações pelos dois métodos) para mudança de um para outro e escolha de um único marcador preferencial para seguimento da proteinúria.

INTRODUCTION: The urinary protein/creatinine ratio has been used instead of 24-hour proteinuria in Nephrology practice for the follow-up of glomerular diseases, considering the advantages of collection and the low cost. However, there are still doubts as to its applicability both for an isolated evaluation and for the follow-up of patients with lupus nephritis. OBJECTIVE: To evaluate 24-hour proteinuria determinations and random urine samples, performing urinary creatinine correction and urinary protein/creatinine ratio in subjects with lupus nephritis. METHODS: 24-hour proteinuria and urinary protein/creatinine ratio were determined by conventional methods (automated Pyrogallol for proteinuria and alkaline picrate for creatinine). RESULTS: Seventy-eight urine samples of 41 patients diagnosed with systemic lupus erythematosus, according to the American Rheumatology Association, with lupus nephritis, were analyzed, and a good correlation between 24-hour proteinuria and urinary protein/creatinine ratio (r = 0.9010 and r² = 0.813) was observed. However, a poor correlation between random proteinuria (without creatinine correction) versus 24-hour proteinuria (r = 0.635 and r² = 0.403) or versus urinary protein/creatinine ratio (r = 0.754 and r² = 0.569) was seen. CONCLUSION: 24-hour proteinuria and urinary protein/creatinine ratio were useful in the follow-up of each case. However, we observed that the absolute values were different, which did not allow the replacement of one for the other during follow-up, especially when this result is used to define the activity of the disease. Based on these results, we suggest a period of intersection from one to the other (two to three determinations by both methods), and the choice of one marker for proteinuria follow-up, if necessary.

Are serum cystatin C levels influenced by steroid doses in lupus nephritis patients? / Os níveis séricos de cistatina C sofrem influência da dose de corticoide em pacientes com nefrite lúpica?

INTRODUÇÃO: A cistatina C é considerada como um teste promissor para avaliar a taxa de filtração glomerular, pois apresenta características de um marcador endógeno ideal, sendo similar ou até superior à creatinina sérica, segundo alguns estudos. No entanto, é possível que alguns fatores (como corticoterapia) influenciem os níveis séricos da cistatina C, independente da taxa de filtração glomerular. Procurouse investigar se diferentes doses de glicocorticoides afetariam os níveis do marcador em pacientes com nefrite lúpica. MÉTODOS:Foramavaliados42pacientescom nefrite lúpica, submetidos a 109 coletas de sangue diferentes; a idade média deles era de 37,7 ± 13,1 anos, e 88 por cento eram do sexo feminino; a taxa de filtração glomerular estimada média era de 61,9 ± 20,0 mL/min. Os pacientes foram divididos, de acordo com a dose de corticoide, em dois grupos: A - altas (pulsoterapia com metilprednisolona e prednisona > 0,5 mg/kg/dia, n = 14) versus B - baixas doses (prednisona ≤ 0,5 mg/kg/dia, n = 28). Os níveis de creatinina sérica foram usados como parâmetros de comparação em relação à função renal. A cistatina C foi determinadapor metodologia desenvolvida in-house, usando citometria de fluxo na plataforma Luminex. RESULTADOS: Considerando esses dois grupos, os níveis de cistatina C foram diferentes apenas nas amostras da segunda consulta (p = 0,106). Mas, quando considerados os níveis de creatinina sérica nos mesmos grupos, foi observada uma diferença marginalmente significante entre eles (p=0,070), sugerindo que a diferença nos níveis de cistatina C entre os grupos foi causada por suas respectivas taxas de filtração glomerular. Não houve diferença entre os que receberam, ou não, pulsoterapia. CONCLUSÕES: Embora alguns estudos tenham mostrado que os glicorticoides podem influenciar os níveis de cistatina C, não foi observada tal interferência nesta população de pacientes com nefrite lúpica submetidos à corticoterapia.

INTRODUCTION: Cystatin C is considered a promising test to evaluate glomerular filtration rate, since it has characteristics of an ideal endogenous marker, being similar or even superior to serum creatinine according to some studies. However, it is possible that some factors (as corticotherapy) could have an influence on serum cystatin C levels regardless of the glomerular filtration rate. The aim of this study was to investigate if different doses of glucocorticoid could have an influence on serum cystatin C levels in lupus nephritis patients. METHODS: We evaluated 42 patients with lupus nephritis that performed 109 different blood collections; their mean age was 37.7 ± 13.1 years old, and 88 percent were female; the mean estimated glomerular filtration rate was of 61.9 ± 20.0 mL/min. Patients were divided according to their glucocorticoid dose in two groups: A - high (pulse therapy with methylprednisolone and prednisone > 0.5 mg/kg/d, n = 14) versus B - low doses (prednisone ≤ 0.5 mg/kg/d, n = 28). Serum creatinine levels were used as parameters for renal function comparison. Cystatin C was determined by an in-house methodology, using Luminex system flow citometry. RESULTS: Considering these groups, cystatin C levels were different only in the second visit (p = 0.106). But, when the serum creatinine levels were considered in the same groups, a marginally significant difference among them (p = 0.070) was observed, which suggested that the difference in cystatin C levels between the groups was caused by their respective glomerular filtration rate. There was not any difference between those groups that received or did not receive pulse therapy. CONCLUSION: Although some previous studies have shown that glucocorticoid has an influence on serum cystatin C levels, we have not observed such interference in the lupus nephritis patients submitted to corticotherapy.

Cistatina C sérica: uma alternativa prática para avaliação de função renal? / Serum cystatin C: a practical alternative for renal function evaluation?

A taxa de filtração glomerular é o principal indicador de função renal em indivíduos saudáveis e doentes. Apesar de todo o desenvolvimento da medicina em nossos dias, ainda há dificuldade para definir-se essa taxa com precisão na prática diária. Marcadores precoces de lesão renal são importantes, porque a taxa de filtração glomerular se reduz antes do aparecimento dos sintomas ou sinais de insuficiência renal. A cistatina C tem sido apontada como uma alternativa, mas ainda não foi testada em muitas condições. Vantagens e desvantagens desse marcador foram aqui discutidas. Embora a determinação sérica da cistatina C comece a ser usada na prática clínica em todo o mundo, ainda não foram completamente esclarecidas suas limitações ou as situações em que está de fato indicada sua aplicação; por outro lado, a creatinina sérica (e sua depuração) é um marcador laboratorial facilmente acessível, de baixo custo, cujas limitações são bem conhecidas, que pode ser usado de forma rotineira para avaliação de função renal.

Glomerular filtration rate is the main marker of renal function in healthy in>dividuals and patients. Despite incontestable advances in medicine, it is still difficult to define precisely this test in clinical practice. Early markers of renal lesion are important, because glomerular filtration rate usually decreases before the first chronic renal failure symptoms or signs appear. Cystatin C has been pointed as an alternative, but it was not tested in many diseases. Advantages and disadvantages of this marker are discussed. Although serum cystatin C determination is increasingly being used in clinical practice worldwide, its limitations as well as the conditions its use is in fact indicated are not adequately established; on the other hand serum creatinine (and creatinine clearance) is an easily available and low cost laboratory marker with well-known limitations that can be used routinely in the assessment of renal function.

Evolution of PTH assays / Evolução dos ensaios para paratormônio

PTH metabolism is complex and the circulating forms include the intact 1-84 molecule as well as several carboxyl-terminal fragments. The first generation of PTH assays included several types of competitive assays, with specificities that spanned carboxyl, mid-region and amino-terminal portions of the molecule. The limitations of these assays and the methodological evolution led to the description of 2nd generation non-competitive immunometric assays for PTH in the late 80's, based on the recognition of the PTH molecule by two different antibodies, one directed against de amino-terminal and other against the carboxyl-terminal segments. The observation that in some circumstances "long" carboxyl-terminal segments were also measured by 2nd generation assays led to the development of 3rd generation assays based on amino-terminal specific antibodies that are specific for the first amino acids, measuring only the molecular forms that activate PTH1R. The practical and cost-benefit advantages of these assays are still debatable. The recent observation that carboxyl-terminal fragments of PTH have biological activity via a distinct receptor than PTH1R, points to the future need of more than one assay in order to evaluate parathyroid hormone function.

O metabolismo do PTH e complexo e as formas circulantes incluem o PTH 1-84, assim como fragmentos C-terminal. A primeira geração de ensaios para o PTH incluía vários ensaios competitivos com especificidades para as regiões carboxi, meio da molécula e amino-terminal. A limitação destes ensaios e a evolução metodológica, levaram ao desenvolvimento dos ensaios não competitivos de 2ª. geração no final dos anos 80, baseados no reconhecimento por dois anticorpos diferentes, contra a porção amino e carboxi-terminal respectivamente. A observação que em algumas circunstâncias segmentos carboxiterminais longos também eram detectados, levou ao desenvolvimento dos ensaios de 3ª. geração, baseados em anticorpos específicos para a porção aminoterminal com maior especificidade para os primeiros aminoácidos, e assim mensurando apenas a forma molecular que ativa o PTH1R. As vantagens práticas e o custo-benefício deste ensaio ainda e motivo de debate. A observação recente de que fragmentos carboxiterminais têm atividade biológica via receptor distinto, aponta para a necessidade futura de mais de um ensaio para avaliar a função do paratormônio.

Valores inesperadamente elevados de TSH: a presença de formas de alto peso molecular ("macro TSH") deve ser investigada / Unexpected high values of TSH: the presence of high molecular weight forms (macro TSH) must be investigated

As metodologias empregadas para a medida de TSH sérico apresentam níveis de especificidade e sensibilidade, tanto diagnósticas como analíticas, bastante elevadas. Adicionalmente, são metodologias bastante robustas, de maneira que resultados falso-positivos ou falso-negativos são raros e inesperados. Descrevemos neste trabalho dois casos de indivíduos descritos como eutiróideos, sem antecedentes de doenças autoimunes e sem referência ao uso de TSH exógeno, que apresentavam níveis de TSH de normais a muito elevados, dependendo da metodologia empregada. Em três métodos testados para a medida de TSH a diluição seriada das amostras mostrou que os níveis reais situavam-se entre 250 e 300 mUI/L. Nos dois casos, o aumento de TSH foi ocasionado pela presença de proteínas ligadoras de TSH no soro, formando formas de alto peso molecular ("macro TSH"), demonstradas por cromatografia de gel filtração em coluna de Superdex S-200. Em uma das pacientes a proteína ligadora foi caracterizada como IgG através de cromatografia em proteína G sepharose, na outra, a ligação em proteína G e em coluna de sepharose acoplada a monoclonal anti-IgM não conseguiu caracterizar a proteína ligadora sérica. Estes casos salientam a importância da correlação clínico-laboratorial e sugerem a necessidade de se pesquisar a presença de macro TSH em pacientes com níveis de TSH anormalmente elevados.

Valores de paratormônio obtidos com ensaios imunométricos dependem da especificidade do anticorpo amino terminal empregado / Parathyroid hormone values obtained with immunometric assays depend on the amino-terminal antibody specificity

A introdução de ensaios imunométricos (EIM) de 2ª geração, tornaram a medida de paratormônio (PTH) sérico mais disponível, simples e rápida, aumentando sua utilização. Esses métodos, baseados em dupla identificação da molécula de PTH, mediriam supostamente a molécula intacta, bioativa, de seqüência 1-84. Recentes trabalhos mostraram que eles também medem formas com deleções amino-terminais, como a forma 7-84, que não ativam o receptor tradicional de PTH (PTH1R). Em função disto, um aspecto prático importante é a definição das formas de PTH medidas pelos EIM, sendo que estas dependem da especificidade dos anticorpos empregados. Neste trabalho, comparamos um ensaio imunofluorométrico por nós desenvolvido, que apresenta reatividade cruzada de 50 por cento com a seqüência 7-84 do PTH, com dois ensaios comerciais de 2ª geração, que reagem 100 por cento. Numa 1ª. comparação, 135 amostras de soro foram dosadas com o nosso ensaio e com um ensaio eletroquimioluminescente, obtendo-se uma correlação de 0,961 (P<0,0001) e medianas de 35,0 e 51,0ng/L (P<0,001). Numa 2ª. comparação, 252 amostras foram dosadas com nosso ensaio e com um ensaio imunoquimioluminométrico, obtendo-se uma correlação de 0,883 (P<0,0001) e medianas de 36,0 e 45,5ng/L (P<0,0001). Em ambos os casos, os dados obtidos com nosso ensaio foram significativamente mais baixos, dados condizentes com a especificidade do anticorpo amino-terminal empregado. Nossos dados reiteram a necessidade de descrição precisa da especificidade dos anticorpos amino-terminais empregados em ensaios de PTH de 2ª geração, de maneira a melhor comparar resultados e definir faixas de normalidade.

Desenvolvimento de ensaio imunofluorométrico para a medida da globulina ligadora de tiroxina (thyroxine-binding globulin, TBG) e sua aplicaçäo em casos de deficiência desta proteína / Development of an immunofluorometric assay for thyroxine-binding globulin (TBG) and its application in cases of protein deficiency

A globulina ligadora de tiroxina (thyroxine-binding globulin, TBG) é a principal transportadora de hormônios tiroidianos no soro. Variaçöes na concentraçäo sérica de TBG determinam variaçöes proporcionais nas concentraçöes séricas totais de T4 e T3, sem implicar alteraçöes de funçäo, desde que a fraçäo livre permaneça normal. Várias condiçöes clínicas comuns levam a alteraçöes significativas nos níveis de TBG, sendo as variaçöes mais importantes devidas a defeitos genéticos. Como a TBG é codificada por gene localizado no cromossomo X, os defeitos se manifestam mais facilmente no sexo masculino. Descrevemos o desenvolvimento de ensaio imunofluorométrico para a medida de TBG com base em anticorpos monoclonais, sendo um desenvolvido em nosso laboratório e outro comercial. O método apresenta sensibilidade de 0,8mg/l e coeficientes de variaçäo intra e interensaio inferiores a 10 por cento. O estudo comparativo com método comercial mostrou alta correlaçäo (r = 0,93; n = 48), sendo os valores normais obtidos de 10mg/l a 29mg/l. Estudamos também 20 indivíduos portadores de deficiência congênita de TBG, 19 homens e uma mulher, que apresentavam valores normais de TSH e baixos de T4 total; em todos eles os níveis de TBG foram indetectáveis. Já os níveis de T4 livre medidos por método indireto em 16 desses indivíduos mostraram-se elevados em todos, ao passo que, quando medidos por método direto pós-diálise nos quatro restantes, mostraram-se normais. Nossos resultados reforçam a necessidade prática da disponibilidade de ensaio para a medida de TBG para esclarecimento e definiçäo diagnóstica de alguns casos especiais, principalmente quando o ensaio de T4 livre direto, pós-diálise, näo é disponível

Produçäo de anticorpos monoclonais contra dehidroepiandrosterona (DHEA) e seuemprego no desenvolvimento de ensaios para a dosagem sérica de DHEA-sulfato (DHEA-S) / Monoclonal antiboidies against dehtdroepiandrosterone(DHEA) and their use in the development of assays for serum measurement of DHEA-sulphate (DHEA-S)

Neste trabalho, descrevemos nossa experiência na produçäo e caracterizaçäo de anticorpos monoclonais contra o sulfato de dehidroepiandrosterona (DHEA-S), sua caracterizaçäo e seu uso no desenvolvimento de radioimunoensaios tradicionais, mediante a comparaçäo dos resultados obtidos com um radioimunoensaio clássico empregando anticorpo policlonal. Foram caracterizados três anticorpos monoclonais (H6P4, B2P2 e G10p6) que apresentam coeficientes de afinidade entre 4 x 108 e 1,6 x 109 L/M e especificidades variáveis. A comparaçäo entre os valores obtidos com os três anticorpos monoclonais e aqueles obtidos com o ensaio tradicional mostrou excelente grau de correlaçäo. Os valores obtidos com o anticorpo monoclonal B2P2 apresentaram melhor índice de correlaçäo. Estudos adicionais mostraram que as características do ensaio, que empregou o anticorpo monoclonal B2P2, säo semelhantes àquelas do ensaio tradicional com anticorpo policlonal. Os anticorpos monoclonais obtidos podem servir de base para ensaios mais simples para a dosagem sérica de DHEA-S

Níveis urinários da proteína transportadora do retinol em uma populaçäo pediátrica: evoluçäoem funçäo da idade / Retinol-biding protein urinary levels in a pediatric population: evolution according to age

Objetivo: O rim da criança, em particular e do recém-nascido, é especialmente susceptível a injúrias isquêmicas e/ou tóxicas, que comprometem preferencialmente os túbulos renais. Assim, marcadores precoces e fidedignos da funçäo tubular renal seriam bastante úteis em Pediatria. A proteína transportadora de retinol utinária (RBPu) vem sendo utilizada com este propósito, funcionando como marcador de funçäo do túbulo contornado proximal (TCP). Nesse sentido, nosso objetivo foi avaliar o comportamento da RBPu em crianças para estabelecer um padräo de referência e avaliar possíveis diferenças entre as diversas faixas etárias. Métodos: Estudamos crianças normais, entre um mês de idade e 8 anos, e recém-nascidos normais, a termo (RNT) e pretermo (RNPT), estes últimos sem intercorrências além das inerentes à prematuridade, as quais näo determinaram repercussöes hemodinâmicas. Foram coletadas amostras isoladas de urina, sendo uma coleta para crianças acima de 1 mês e coletas periódicas abaixo desta idade. Nesta urina, além da realizaçäo de fita-teste...

Desenvolvimento de um método imunofluorométrico para a medina de anticorpos séricos contra tiroglobulina / Development of an immunofluorometric method for measurement of serum antibodies against thyroglobulin

A pesquisa e quantificaçao de anticorpos séricos contra os antígenos tiroideanos tiroglobulina e tiroperoxidase apresenta grande interesse clínico. Neste trabalho descrevemos o desenvolvimento de um novo método para a pesquisa de anticorpos anti-tiroglobulina e a comparaçäo dos resultados obtidos com este método e os obtidos com um ensaio competitivo de referência para anticorpos anti-peroxidase tiroideana (anti-TPO). Tiroglobulina humana purificada é adsorvida em placas de microtitulaçäo e amostras ou controles säo adicionados numa diluiçäo de 1/100. Após duas horas de incubaçao a placa é lavada e acrescenta-se um monoclonal anti-IgG humana marcado com Európio. O monoclonal foi produzido em nossos laboratórios e reage com as quatro subclasses de IgG humano. A sensibilidade do método foi calculada em 40 UI/mL, e o erro interensaio é inferior a 5 por cento ao longo de toda a curva padräo. O método foi aplicado em 602 amostras de soro de rotina diagnóstica nos quais foi também realizada a pesquisa de anticorpos anti-TPO. Em 302 soros (50,2 por cento) ambos os testes foram negativos; em 178 (29,6 por cento) ambos foram positivos; em 62 (10,2 por cento) apenas o teste para anticorpos anti-tiroglobulina foi positivo e em 60 (10,0 por cento) apenas o teste para anticorpos anti-TPO foi positivo. O método nao sofre interferência de níveis elevados de tiroglobulina na amostra. Nossos achados sugerem que os resultados da pesquisa de anticorpos anti-tiroglobulina e anti-TPO com métodos sensíveis e específicos säo complementares no diagnóstico de doenças autoimunes da tiróide.

Desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico para a dosagem de prolactina sérica e identificaçäo das isoformas circulantes / Development of a fluoroimmunoassay for the seric prolactin dosage and identification of circulatory isoforms

A prolactina é um peptídeo linear que na sua forma principal tem 199 aminoácidos e peso molecular de 23 kDa. Diversas isoformas circulantes foram descritas, sendo as mais significativas as de alto peso molecular ("big-big"), e as formas glicosiladas. Com o intúito de produzir anticorpos monoclonais visando o desenvolvimento de um ensaio imunométrico contra prolactina, imunizamos camundongos com prolactina humana de origem hipofisária. Os dois animais com melhores títulos foram sacrificados e os esplenócitos utilizados em duas fusöes independentes. Dez linhagens estáveis foram produzidas, sendo que duas (A12P10 e A12P3) foram empregadas no desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico. O ensaio apresenta uma sensibilidade de 0,4 ng/mL e o perfil de imprecisäo mostra erro inferior a 10 por cento entre 0,8 e 120 ng/mL. Os resultados obtidos com este ensaio em 384 amostras de rotina foram comparados com os obtidos com um ensaio comercial de referência (Wallac), obtendo-se uma correlaçäo de r=0,91. Soros de pacientes com prolactinoma foram cromatografados em colunas de Sephacryl S-200 e Concanavalina A Sepharose com o intúito de separar as formas de also peso molecular e as formas glicosiladas. A determinaçäo dos níveis de prolactina no eluato dessas colunas mostrou que o novo ensaio reconhece as principais isoformas circulantes de prolactina.

Estudo de um radioimunoensaio para a dosagem de testosterona sérica empregando anticorpo monoclonal / Study of a monoclonal antibody-based radioimmunoassay for serum testosterone

Apresentamos os resultados por nós obtidos na produção e uso de um anticorpo monoclonal contra testosterona. Camundongos foram imunizados com o conjugado de testosterona acomplado a partir da posição 3 com albumina bovina. As técnicas de produção foram as clássicas e um monoclonal (C7P4) foi escolhido com base em suas características de afinidade e especificidade. A comparação da especificidade deste monoclonal com um policlonal gerado contra o mesmo conjugado, em relação a um número limitado de esteróides mostrou serem os mesmos superponíveis. A aplicação do monoclonal produzido num radioimunoensaio clássico mostrou um ensaio de características de sensibilidade e erro semelhante às obtidas com o policlonal. A dosagem de 206 amostras de soro submetidas à extração etérea simples pelos dois ensaios (mono e policlonal) mostrou que o monoclonal resultou em valores significativamente mais baixos, com medianas de 58 ng/dl e 98 ng/dl, respectivamente (P<0,0001). O esudo adicional de 40 amostras de soro submetidas à extração simples e à extração seguida de cromatografia em coluna de Celite, mostrou que os resultados obtidos com o ensaio monoclonal nas amostras com extração simples eram semelhantes às obtidas com o ensaio policlonal nas mesmas amostras submetidas à extração e cromatografia (p=0,1483). Nossos dados sugerem que o monoclonal produzido pode servir de base para ensaios mais simples e específicos para a dosagem de testosterona sérica, bem como para o desenvolvimento de ensaios não-competitivos

Produçåo de anticorpos monoclonais contra alfa fetoproteína e seu emrpego no desenvolvimento de um ensaio imunofluormétrico / Production of monoclonal antibodies against alpha fetoprotein and its use in the development of an immunofluorometric assay

A alfa fetoproteína (AFP) é uma glicoproteína produzida normalmente pelo fígado fetal e saco vitelino. No adulto aumentos significativos dos valores séricos såo encontrados em alguns tipos de câncer e inflamaçöes hepáticas. Além de seu papel importante como marcador tumoral, a AFP tem tido grande importância nos programas de detecçåo pré-natal de anomalias fetais. Com base numa série de anticorpos monoclonais produzidos em nossos laboratórios contra AFP, desenvolvemos um ensaio imunofluormétrico empregado dois deles (F10P1 e C8P5). O traçador utilizado foi o Európio, sendo que o ensaio emprega placas de microtitulaçào como fase sólida, pode ser completado em 4 horas e, com alíquotas de 100 µL, a sensibilidade é da ordem de 0,01 ng/mL. O perfil de imprecisåo mostrou um erro inferior a 10//ao longo de toda curva padråo (1 a 200 ng/mL); o erro interensaio também mostrou-se inferior a 10 por cento. O estudo comparativo do método com um kit comercial tecnicamente semelhante (Delfia-AFP) mostrou excelente correlaçåo (r=0,953, n=134). O ensaio desenvolvido, com alta sensibilidade, robustez, estabilidade, rapidez e menor custo permitirá uma ampliaçöes da dosagem de AFP nos nossos serviços diagnósticos

Emprego de anticorpos monoclonais no desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico de alta sensibilidade para a dosagem de FSH: estudo dos níveis séricos em meninos normais nos diferentes estádios puberais / Use of monoclonal antibodies in the development of a high sensibility immunofluorometric assay to the FSH: study of the serum levels in normal boys at the pubertal stages

Produzimos sete anticorpos monoclonais contra FSH, que foram isolados e caracterizados. Dois reconhecem exclusivamente FSH, sendo que um deles (EllP3), escolhido para anticorpo de captura no desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico. Para marcaçao com Európio escolhemos um monoclonal anti subunidade alpha. O ensaio desenvolvido pode ser efetuado em aproximadamente 4 horas, apresenta sensibilidade em torno de OO5 UI/L e alto grau de precisao. A dosagem de 82 amostras de soro de rotina diagnóstica por este método e por um ensaio imunofluorométrico comercial, mostrou alto grau de correlaçao entre os resultados (r=0,988). Dosagens foram efetuadas também em 75 soros de meninos normais nos diferentes estadios puberais, sendo em todos êles o nível de FSH detectável, variando de O,3 a lO, l UI/L. Diferenças significativas foram observadas entre os níveis dos grupos Gl vs. G4+5 (P<0,001), Gl vs. G3 (p

Desenvolvimento de ensaio imunométrico para a dosagem sérica da subunidade alfa dos hormônios glicoproteicos / Development of an immunoflurometric assay for serum alfa subunit of the glycoprotein hormones

Tendo como base um anticorpo monoclonal e um policlonal, desenvolvemos um ensaio imunofluorométrico para a medida de subunidade alfa no soro. O anticorpo monoclonal contra subunidade alfa, empregado para captura, foi produzido a partir de um camundongo imunizado contr LH e apresenta reatividade cruzada contra as formas íntegras dos hormônios glicoproteicos. Já o anticorpo policlonal foi produzido em coelho imunizado com subunidade alfa livre e apresenta baixa reatividade cruzada com os hormônios íntegros. Para a revelaçäo da ligaçäo do policlonal à subunidade capturada pelo monoclonal, empregamos um monoclonal anti-IgG de coelho marcado com európio. O ensaio apresenta reatividade cruzada de 2,8 por cento com hCG, 3,2 por cento com FSH, 6,4 por cento com TSH e 9,4 por cento com LH. A sensibilidade é da ordem de 50 ng/L, com perfil de imprecisäo mostrando um erro intraensaio inferior a 10 por cento entre os valores 100 e 20.000 ng/L. O coeficiente de variaçäo interensaio mostrou-se inferior a 14 por cento dentro da faixa de valores encontrados. A definiçäo de valores normais foi feita a partir de uma populaçäo normal de 66 adultos, 33 homens e 33 mulheres na menacme, onde encontramos valores entre 70 e 902 ng/L, com mediana de 236 ng/L. Em 14 mulheres mnenopausadas econtramos valores entre 1.498 e 3.919ng/L. A aplicaçäo do ensaio em 33 pacientes com diagnóstico de tumor hipofisário (11 acromegálicos, 15 prolactinomas, 6 tumores "näo secretores" e 1 tumor produtor de TSH) mostrou valores elevados em 11 pacientes

Desenvolvimento de um ensaio imunofluorométrico para a medida da molécula inteira da gonaatrofina coriônica (hCG) no soro / Development of an immunofluorometric assay for serum measurement of the whole molecule of human chorionic gonatropin (hCG)

Tendo como base dois anticorpos monoclonais produzidos em nosso laboratório, um específico contra a subunidade beta de hCG/LH (E2P1) e outro específico contra um epítopo descontínuo presente na molécula inteira da hCG (F1P16), desenvolvemos um ensaio imunométrico específico para a molécula inteira de hCG. O monoclonal E2P1 foi adsorvido a placas de microtitulaçåo e o monoclonal F1P16 foi marcado com Európio; o ensaio consta de duas incubaçöes sequenciais de 1h cada e leitura final de fluorescência em fluorômetro tempo-sincronizado. A sensibilidade calculada foi de 1,8 UI/L; o perfil de imprecisåo mostrou erro inferior a 19 por cento entre os valores de 5 a 3000 UI/L; o coeficiente de variaçåo interensaio mostrou-se de 8 por cento para uma amostra de valor médio de 1065 UI/L (n=15) e de 13,9 por cento para outra de valor médio de 28 UI/L (n=15). A comparaçåo com método equivalente (Delphia hCG) nåo mostrou nenhuma discordância em 300 amostras dosadas sequencialmente, sendo que em 1388 amostras onde os valores eram iguais ou superiores a 20 UI/L pelo Delfia, obtivemos alto índice de correlaçåo (r=0,988). Os valores obtidos pelo nosso método mostraram-se discreta, porém, significativamente mais elevados, com medianas de 4610 e 4370 UI/L, respectivamente